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教您如何正确对液相色谱柱使用缓冲盐?
更新时间:2021-06-23   点击次数:2174次
  液相色谱柱在使用前,先进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行,只有这样,测得的结果才有可比性。
  
  本产品可适用范围广,从极性化合物到非极性化合物都可获得良好的分离,在碳水化合物如低聚糖、苷类糖化学,生药学和天然产物化学,生物物质如多肽、蛋白、核酸等多个领域发挥重要作用。
 
  液相色谱柱正确使用缓冲盐:
  缓冲盐通常易溶于水,难溶于有机溶剂,因此缓冲盐使用不当会使其析出,堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙,使填料板结,柱压上升;同时阻碍了基质上键合的碳链自由舒展,使色谱柱的保留能力下降,柱效降低。缓冲盐析出后,去除非常困难,因此,正确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要。
  
  正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出,因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话:使用前要过滤,使用后要冲洗。具体方法如下:
  1、等度条件:使用缓冲盐前和使用后需用过渡流动相以1、0ml/min流速冲洗60min;使用后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相以0、2ml/min流速冲洗色谱柱过夜。
  2、梯度条件:用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前,用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1、0ml/min流速冲洗60min,再用该过渡流动相以1、0ml/min冲洗色谱柱120min。含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓,以避免梯度过程中缓冲盐析出。
  3、缓冲盐析出的补救方法:
  a、用甲醇/20/80以1、0ml/min流速35摄氏度条件下反向冲洗色谱柱120min
  b、用甲醇/水=20/80以0、2ml/min流速反向冲洗色谱柱过夜。
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