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用一分钟时间带您正确认识C18色谱柱的使用方法
更新时间:2022-06-27   点击次数:3790次
  C18色谱柱根据极性分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合-CN、-NH3等官能团的键合相硅胶柱;反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18柱,其它常用的反相柱还C8、C4、C2和苯基柱等。
 
  C18色谱柱的构造:
  由柱管、压帽、卡套、筛板、接头、螺丝等组成。柱管多用不锈钢制成,也可采用厚壁玻璃或石英管,管内壁要求有很高的光洁度。为提高柱效,减小管壁效应,不锈钢柱内壁多经过抛光。也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度,其效果与抛光相同还有使用熔融硅或玻璃衬里的,用于细管柱。
  色谱柱两端的柱接头内装有筛板,是烧结不锈钢或钛合金,取决于填料粒度,目的是防止填料漏出,柱内径一般是根据柱长、填料粒径和折合流速来确定,目的是为了避免管壁效应。
 
  C18 色谱柱的使用方法:
  1、新柱活化:新的色谱柱活化:采用100%甲醇1ml/min冲洗60min,再换成流动相进行平衡;如果流动相中含有缓冲盐,在换成流动相前,请使用过渡流动相过渡后再换流动相平衡;
  2、色谱柱保存溶液与评价报告一致。
  3、在使用过程中如果流动相没有磷酸缓冲盐的存在,新柱子在使用之前需用100%的甲醇以0.5~1.0的流速平衡30min左右,进流动相,待系统基线平稳直接进样即可。做完实验再用100%的纯甲醇以0.5~1.0的流速冲洗30min左右,最后用100%的纯甲醇保存。
  4、在使用过程中如果流动相有磷酸缓冲盐的存在,新柱在使用之前需用10%的甲醇水溶液以0.5~1.0的流速冲洗60min左右,将新柱高浓度甲醇溶液*置换掉,进流动相,待系统基线平稳直接进样即可。做完实验再用10%的甲醇(色谱纯)水溶液以0.5~1.0的流速冲洗60min左右,将色谱柱中缓冲盐溶液*置换掉,最后用100%的纯甲醇清洗色谱柱30min,最后用纯甲醇保存色谱柱。
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